RPC模式分析極性物質

在前一篇文章總結了分析極性物質的方法，其中之一就是使用RPC來分析極性物質，本章將重點介紹使用RPC分析極性物質的原理以及應用。本篇文章基本上來自於《introducing to morden liquid chromatography》的第七章的第一部分，所以想進一步了解的可以看這本書。

早期分析極性物質始終是一件比較麻煩的事情，因為第一，沒有開發出如HILIC模式的色譜方法，第二是離子色譜應用並不廣泛，第三，對於RPC分析極性物質的原理沒有搞清楚。而現在，這些問題均已解決，分析極性物質已是我們平常工作的一部分，所以對於每一個色譜工作者必須要學會的技能。

圖1 酸鹼平衡與其在RPC保留能力的關係

如圖1 所示，離子化狀態的物質更親水，在RPC中也更不容易保留，相反未電離的酸或鹼在RPC中更能保留。

圖2 pKa與pH關係公式

如圖2 是酸鹼的平衡計算公式 ，當pH=pKa時，未電離的酸與電離的酸濃度相等，如圖3所示，對於酸來說，隨著ph的增大，保留時間越來越弱，而在pH=pKa1之內時，保留時間變化很大，實驗證實，在這區段ph每變化0.1，保留時間將變化10%，pH1之外時保留時間變化很小，所以對於分析目標酸，流動相最好低於pka一個單位，這樣才能保證重複性。鹼同理。

圖3 pH與保留因子、離子化之間的關係

圖4 ph對於各種物質保留行為的影響

如圖4所示是更進一步將各種酸鹼保留行為畫了出來，對於弱酸，其保留行為變化不大，只有當ph大於7以後，或者大於8以後，其保留時間才明顯減小，對於弱鹼來說，當ph在5到7之間變經較大。當PH大於7時保留時間明明顯增大，且保留時間變化將明顯減小。

其次講流動相緩衝液的選擇，對於一個目標物質，根據其pka，選擇流動相的pH值，而對於流動相，保證其流動相pH穩定性非常重要，因為pH值的變化會引起保留時間的變化，其次對於流動相，一般是在水相中調節pH，而水相最終要和有機相混合，因此pH值可能隨著與有機相的混合而發生變化。保證pH值穩定的能力稱之為緩衝液的緩衝能力。實踐證明，緩衝液的緩衝能力是其pka=pH時，也即離子化的與未離子化的濃度相等時緩衝能力最大，pH與pKa相差越大，緩衝能力越弱。也即緩衝液的pka需要在流動相pH1之內。

圖4 流動相中使用到的pH緩衝液。

為了保證流動相PH的穩定性，樣品使用流動相溶解，注意，儘管進樣體積只有幾十微升，與流動相體積相比微不足道，但是在分析過程中，樣液的擴散可能並不迅速，其與硅羥基的反應將大於其擴散過程，所以樣液的性質是不能忽視的重要因素。

其次，由於大部分C18柱都是鍵合在硅膠上，而硅膠上存在硅羥基，儘管很多公 司推出耐鹼柱子，但是一般不建議流動相溶液呈鹼性。

以上就是這篇文章的全部內容。現在如果要分析苯胺這種物質，將怎樣配製選擇流動相呢？苯胺是弱鹼性物質，其流動相需要調成鹼性嗎？為什麼？對於苯胺來說，選定一個PH值後，其分離檢測的是其電離的，還是未電離狀態的目標物？如是這樣，會不會對其總量分析造成影響呢？

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