三葉青知識點，多糖的分離和含量測定

三葉青多糖具有獨特的藥理活性,在臨床應用中具有很大潛力。但由於多糖的結構複雜,導致其結構測定及合成具有一定的難度和特殊性。同時其在天然產物中含量較低而不易被分離,為多糖研究和臨床應用帶來了挑戰。

一、多糖的分離

三葉青中多糖的提取方法主要有迴流法、沸水法、稀酸法、超聲法、稀鹼法I和稀鹼法Ⅱ。其中稀鹼法I和稀鹼法Ⅱ的多糖提取效率高於其他提取方法。而067稀鹼法Ⅰ略高於稀鹼法Ⅱ,通過條件優化,確定提取溫度為70℃、提取時間為1.5h、液料比為35:1、提取次數為2次建立最佳的稀鹼法I三葉青多糖提取條件。而在後續的多糖純化條件優化實驗中選定,靜置時間為5h,7000min為最佳轉速,5min為最佳離心時間建立三葉青多糖的純化方法。由於鹼性條件會破壞蛋白質與多糖的共價結合,釋放更多的多糖類物質,因此多糖類物質的提取效率在鹼性條件下與pH成正比。但在實際的提取分離中,考慮到其他成分的協同提取,在不適合採用稀鹼法的情況下,迴流法是比較理想的選擇。另外俞盈等申請了三葉青藤多糖提取物及其製備方法和應用的發明專利,為三葉青多糖成分的生物活性研究提供了方法支撐。

二、多糖的測定

由於多糖的結果複雜,其多糖含量的測定存在一定難度,目前多採用葡萄糖+3,5-二硝基水楊酸液和水+3,5-二硝基水楊酸液作為測定基質溶液。在優化波長範圍時發現在400~480mm以上兩溶液的吸光值不穩定,而在580~600mm葡萄糖+3,5-二硝基水楊酸液的吸光值接近於0,因此將測定的波長範圍擬定在480~570m。經過進一步的實驗條件優化,確定水浴加熱時間5min加熱溫度90℃、靜置時間20min、3,5-二硝基水楊酸的用量7mL為三葉青多糖的最佳測定實驗條件。

目前的三葉青化學成分測定主要依賴於傳統的理化鑒定手段,主要依據一類指標成分的化學特徵,如特定的顯色反應,隨著高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、高效毛細管電泳(HPCE)等色譜技術的發展和色譜-光譜聯用鑒定技術的出現,可以精確反映中藥材的化學組分,迅速地成為中藥鑒定和質量控制與評價的有效手段。化學鑒定方法的另一大類是光譜分析技術,該技術以紅外光譜、紫外光譜、ⅹ-衍射光譜、拉曼光譜、熒光光譜等技術為代表,在混合組分的特徵分析上具有獨特的優勢。范世明等還提供了一種檢測三葉青葉中多種化學成分的方法與流程,為三葉青葉的開發利用和質量評價提供了可靠的實驗依據。

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