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穩定轉染細胞時,質粒總是丟失,大家有什麼解決方案嗎?

用質粒穩定轉染細胞時,質粒總是丟失,流式細胞儀檢測無信號,大家有什麼解決方案嗎?


不存在穩定轉染這一說法,正確表述為「構建xx穩定表達細胞系」。轉染是一個過程,穩定轉染是在瞬時轉染的基礎上產生的,由於轉入細胞核的質粒有很小的概率整合進宿主的基因組中,所以可以用一些抗生素將這種細胞篩選出來並擴大培養,由於質粒穩定的進入了基因組,所以效果穩定存在。慢病毒載體,只有與輔助載體(包裝載體)共轉染才有可能整合到細胞基因組中,從而穩定表達。最好是加puro葯篩後,種96孔板,篩選出單克隆細胞。單個細胞生長起來的,性狀穩定,不存在質粒丟失一說。如果是未經篩選的細胞,傳代過程中,目的細胞增殖沒有正常細胞快,所佔比例越來越低,讓人產生質粒丟失的錯覺。


加選擇壓


你流式檢測的什麼指標?也可能轉進去但是沒表達呀。。。問題太寬泛了,問個問題不能嚴肅認真點嘛


可否具體一些 說一下你用的什麼方法 什麼細胞 轉的什麼質粒?


lipofectamin 2000,電轉,病毒,病毒+lentiX。

一個一個試過去吧。


是不是改變細胞通透性的溶液稀釋程度過大,所以植入目的基因的噬菌體無法進入細菌,得不到你想要的目的基因。該病毒在人為創造條件下是否有逆轉錄的可能,也有可能是該真核細胞內有抑制病毒逆轉錄的因子。


病毒感染


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